Metodologia
Como a Clonar avalia resistência a doenças
Um resultado de fenotipagem só vale se puder ser repetido. Por isso cada ensaio reproduz as três condições da doença, controla o que pode variar e registra o que foi feito — do isolado usado à temperatura da casa de vegetação.
O princípio
Sem as três condições, não há doença — e o ensaio não separa nada
Para uma análise de resistência confiável, todas as condições requeridas para a ocorrência da doença precisam estar presentes ao mesmo tempo: planta sadia, patógeno agressivo e ambiente favorável à infecção.
- Hospedeiro sadio: mudas padronizadas em idade, porte e sanidade, para que a diferença observada seja genética.
- Patógeno agressivo: isolados do banco com patogenicidade confirmada e agressividade conhecida.
- Ambiente favorável: temperatura, umidade e período de molhamento ajustados a cada patógeno.
As etapas
Seis etapas, cada uma com o seu controle
O que muda de uma doença para outra é o protocolo de cada etapa. A lógica é sempre a mesma.
Escolha dos isolados
Por origem, hospedeiro e agressividade documentada no banco. Para clones que vão a várias regiões, mais de um isolado.
Controle: código do isolado registrado no laudoPadronização das mudas
Mudas sadias, de mesma idade e porte, aclimatadas antes da inoculação.
Controle: descarte de plantas fora do padrãoCasualização e repetições
Clones e testemunhas sorteados nos blocos, para que diferenças de luz e umidade da casa de vegetação não se confundam com genética.
Controle: mapa do ensaio arquivadoInóculo preparado e quantificado
Método adequado a cada patógeno — no lenho, no solo ou na folhagem — com concentração aferida no dia.
Controle: lote e concentração do inóculoAmbiente favorável à infecção
Temperatura, umidade e período de molhamento ajustados ao patógeno, registrados ao longo do ensaio.
Controle: registro contínuo do ambienteMedida, análise e laudo
Escalas padronizadas e medidas diretas, avaliadores treinados, análise estatística e classificação de cada clone.
Controle: testemunhas validam o ensaioDelineamento
Por que sorteamos a posição de cada planta
Dentro de uma casa de vegetação, luz, temperatura e umidade variam de uma bancada para outra. Se o clone A ficasse sempre no canto mais úmido, a doença dele seria do canto, não da genética.
- Blocos: cada bloco contém todos os clones do ensaio, uma vez.
- Sorteio: a posição de cada clone dentro do bloco é casualizada.
- Testemunhas: um clone sabidamente resistente e um suscetível em todos os blocos. Se a testemunha suscetível não adoece, o ensaio não vale e é repetido.
Ilustração do princípio, com 6 clones e 4 blocos. O número de clones, blocos e plantas por parcela é definido em cada proposta.
Escala de avaliação · exemplo da ferrugem
Uma nota que qualquer avaliador treinado repete
Para doenças foliares, a avaliação usa escalas de notas com descrição objetiva de cada classe. Escolha uma nota para ver o sintoma e a classificação correspondente.
Escala ilustrativa de 0 a 4 para ferrugem do eucalipto (Austropuccinia psidii), adaptada de Junghans et al. (2003), Theoretical and Applied Genetics.
Da medida à classificação
Como um número vira "resistente"
1. Medida
Comprimento de lesão no lenho, porcentagem de área foliar afetada, incidência de murcha ou nota de escala — conforme a doença.
2. Análise estatística
Médias por clone, variabilidade entre repetições e comparação com as testemunhas do próprio ensaio.
3. Classificação
Cada clone é classificado como resistente, tolerante ou suscetível em relação às testemunhas, com a recomendação para o programa.
Reprodutibilidade
O que fica registrado em todo ensaio
Para que outro laboratório — ou o mesmo, um ano depois — chegue ao mesmo resultado.
- Código, origem e histórico de cada isolado usado
- Lote e concentração do inóculo no dia da inoculação
- Mapa do ensaio com a posição sorteada de cada planta
- Temperatura e umidade ao longo da incubação
- Datas de avaliação, avaliadores e fotos por clone
Próximo passo
Quer discutir o protocolo antes de contratar?
A equipe técnica apresenta o desenho do ensaio para a sua equipe de melhoramento e ajusta o protocolo à pergunta do programa.
ou escreva para comercialclonar@gmail.com