Metodología
Cómo Clonar evalúa la resistencia a enfermedades
Un resultado de fenotipado solo vale si puede repetirse. Por eso cada ensayo reproduce las tres condiciones de la enfermedad, controla lo que puede variar y registra lo que se hizo — desde el aislado utilizado hasta la temperatura del invernadero.
El principio
Sin las tres condiciones no hay enfermedad — y el ensayo no separa nada
Para un análisis de resistencia confiable, todas las condiciones requeridas para que ocurra la enfermedad deben estar presentes al mismo tiempo: planta sana, patógeno agresivo y ambiente favorable a la infección.
- Hospedero sano: plántulas estandarizadas en edad, tamaño y sanidad, para que la diferencia observada sea genética.
- Patógeno agresivo: aislados del banco con patogenicidad confirmada y agresividad conocida.
- Ambiente favorable: temperatura, humedad y período de humectación ajustados a cada patógeno.
Las etapas
Seis etapas, cada una con su propio control
Lo que cambia de una enfermedad a otra es el protocolo de cada etapa. La lógica es siempre la misma.
Elección de los aislados
Por origen, hospedero y agresividad documentada en el banco. Para clones que irán a varias regiones, más de un aislado.
Control: código del aislado registrado en el informeEstandarización de las plántulas
Plántulas sanas, de la misma edad y tamaño, aclimatadas antes de la inoculación.
Control: descarte de plantas fuera del estándarAleatorización y repeticiones
Clones y testigos sorteados en los bloques, para que las diferencias de luz y humedad del invernadero no se confundan con la genética.
Control: mapa del ensayo archivadoInóculo preparado y cuantificado
Método adecuado a cada patógeno — en el leño, en el suelo o en el follaje — con concentración verificada el mismo día.
Control: lote y concentración del inóculoAmbiente favorable a la infección
Temperatura, humedad y período de humectación ajustados al patógeno, registrados a lo largo del ensayo.
Control: registro continuo del ambienteMedida, análisis e informe
Escalas estandarizadas y medidas directas, evaluadores entrenados, análisis estadístico y clasificación de cada clon.
Control: los testigos validan el ensayoDiseño experimental
Por qué sorteamos la posición de cada planta
Dentro de un invernadero, la luz, la temperatura y la humedad varían de una mesa a otra. Si el clon A quedara siempre en el rincón más húmedo, su enfermedad sería del rincón, no de la genética.
- Bloques: cada bloque contiene todos los clones del ensayo, una vez.
- Sorteo: la posición de cada clon dentro del bloque se aleatoriza.
- Testigos: un clon conocidamente resistente y uno susceptible en todos los bloques. Si el testigo susceptible no enferma, el ensayo no vale y se repite.
Ilustración del principio, con 6 clones y 4 bloques. El número de clones, bloques y plantas por parcela se define en cada propuesta.
Escala de evaluación · ejemplo de la roya
Una nota que cualquier evaluador entrenado repite
Para enfermedades foliares, la evaluación usa escalas de notas con una descripción objetiva de cada clase. Elija una nota para ver el síntoma y la clasificación correspondiente.
Escala ilustrativa de 0 a 4 para la roya del eucalipto (Austropuccinia psidii), adaptada de Junghans et al. (2003), Theoretical and Applied Genetics.
De la medida a la clasificación
Cómo un número se convierte en "resistente"
1. Medida
Longitud de lesión en el leño, porcentaje de área foliar afectada, incidencia de marchitez o nota de escala — según la enfermedad.
2. Análisis estadístico
Medias por clon, variabilidad entre repeticiones y comparación con los testigos del propio ensayo.
3. Clasificación
Cada clon se clasifica como resistente, tolerante o susceptible en relación con los testigos, con la recomendación para el programa.
Reproducibilidad
Lo que queda registrado en todo ensayo
Para que otro laboratorio — o el mismo, un año después — llegue al mismo resultado.
- Código, origen e historial de cada aislado utilizado
- Lote y concentración del inóculo el día de la inoculación
- Mapa del ensayo con la posición sorteada de cada planta
- Temperatura y humedad a lo largo de la incubación
- Fechas de evaluación, evaluadores y fotos por clon
Próximo paso
¿Quiere discutir el protocolo antes de contratar?
El equipo técnico presenta el diseño del ensayo a su equipo de mejoramiento y ajusta el protocolo a la pregunta del programa.
o escriba a comercialclonar@gmail.com